2019年。
作者：丁逸飞，曹春雨，国王。
单位：重庆大学生物工程学院。
丁逸飞四川乐山硕士研究生研究方向：分子遗传学。 通信作者、硕士研究生从事分子生物学和基因工程。
基金项目：国家自然科学基金会项目(3137287)。
根据识别QR代码很长一段时间。
作者对你说了些什么。
OSID开放的科学计划。
动物的复杂和精确的生殖发展由中枢神经系统和内分泌系统控制。 下丘脑中的许多与生殖相关的神经肽信号汇集在GnRH（Gonadotropinghone中。 神经元。 并与下丘脑-垂体性腺（HypothalamicpituigonadalHPG）轴上的各种生殖相关因素相结合。 PNX是2013年生物信息技术中发现的一种新型生殖肽，并在下丘脑和外周组织中得到了广泛的发现。 丘脑中的表达是最高的。
研究发现，PNX可以与受体GPR173相结合，控制下丘脑垂体细胞中的某些生殖基因，并发现PNX涉及成年鼠发情期。 然而，PNX参与生殖控制仍有许多unknown机制。
目的是为了。
PNX沉默载体感染GnRH分泌细胞(GT1≤7)后，对稳定的PNX沉默细胞进行筛选和鉴定。 为进一步探索分子和模型动物级生殖控制机制奠定基础。
这种方法。
结合RNAI干扰技术，在293T细胞中对慢病毒沉默载体进行了包装和测定。 感染GnRH分泌细胞(GT1≤7)。 嘌呤筛选获得稳定细胞后，使用Real-timePCR和Westernblot检测PNX沉默效果..
结果是。
构建SHPNX和SHCON载体和测序。
通过DNA-MAN软件分析，将SHPNX和SHCON载体施工并送至生物公司进行测序。 成功地构建了载体。
慢病毒包装和滴度测量。
包装SHPNX和SHCON慢病毒后，滴度测定为2.2×108TU/ml。 慢病毒滴度为2.5×108TU/ml。
慢病毒感染GT1/7和稳定的细胞菌筛选。
利用shPNX和shCON慢病毒感染GT1/7，采用puromycin筛选，获得稳定的慢病毒感染细胞株(图1)。
图1慢病毒感染稳定细胞植物GFP表示(100)。
PNXMRNA的表达水平。
ShPNX组的PNXMRNA表达量(0.297)明显低于ShCON组(1.167)和阴性控制组(1.000)。 差异显著(P0.01)。
PNX蛋白质表达水平。
ShPNX组PNX蛋白的表达率明显低于ShCON组和阴控组。
图2PNX蛋白质表达水平。
结论是。
慢病毒介导的PNX沉默载体成功地感染了GT1细胞。 而Real-timePCR和Westernblot证实了PNX沉默细胞植物的PNX沉默效果。
慢病毒介导的PNX干扰载体和PNX沉默的GNRH分泌细胞。 可进一步用于探索PNX与GNRH等生殖相关肽之间的关系。 它还可以为PNX在未来的生殖控制和其他生物效应奠定基础。
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